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關(guān)于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的注意事項

發(fā)布時間: 2023-10-11  點擊次數(shù): 653次

本法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素,以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限-量是否符合規(guī)定的一種方法。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查包括兩種方法,即凝膠法和光度測定法,后者包括濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時,可使用其中任何一種方法進行試驗。當(dāng)測定結(jié)果有爭議時,除另有規(guī)定外,以凝膠限度試驗結(jié)果為準(zhǔn)。

本試驗操作過程應(yīng)防止內(nèi)毒素的污染。

細(xì)菌內(nèi)毒素的量用內(nèi)毒素單位(EU)表示,1EU1個內(nèi)毒素國際單位(IU)相當(dāng)。

細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸埃希菌提取精制,并以細(xì)菌內(nèi)毒素國際標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定其效價。用于標(biāo)定、復(fù)核、仲裁鱟試劑靈敏度、標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的效價,干擾試驗及檢查法中編號BC溶液的制備、凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗、光度測定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗。

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價,用于干擾試驗及檢查法中編號BC溶液的制備、凝膠法中鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗、光度測定法中標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水應(yīng)符合滅-菌-注-射-用-水標(biāo)準(zhǔn),其內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml(用于凝膠法)或小于0.005EU/ml(用于光度測定法),且對內(nèi)毒素試驗無干擾作用。

鱟試劑是從鱟的血液中提取出的凍干試劑,可以與細(xì)菌內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng)。除了內(nèi)毒素,鱟試劑還與某些β-葡聚糖反應(yīng),產(chǎn)生假陽性結(jié)果。如遇含有β-葡聚糖的樣品,可使用去G因子鱟試劑或G因子反應(yīng)抑制劑來排除鱟試劑與β-葡聚糖的反應(yīng)。

試驗所用的器皿需經(jīng)處理,以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素。耐熱器皿常用干熱滅菌法(250℃、至少30分鐘)去除,也可采用其他確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的適宜方法。若使用塑料器具,如微孔板和與微量加樣器配套的吸頭等,應(yīng)選用標(biāo)明無內(nèi)毒素并且對試驗無干擾的器具。

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供試品溶液的制備

某些供試品需進行復(fù)溶、稀釋或在水性溶液中浸提制成供試品溶液。必要時,可調(diào)節(jié)被測溶液(或其稀釋液)的pH值,一般供試品溶液和鱟試劑混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范圍內(nèi)為宜,可使用適宜的酸、堿溶液或緩沖液調(diào)節(jié)pH值。酸或堿溶液須用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水在已去除內(nèi)毒素的容器中配制。所用溶劑、酸堿溶液及緩沖液應(yīng)不含內(nèi)毒素和干擾因子。

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