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選擇性清除內毒素的方法之超濾法

發(fā)布時間: 2023-09-04  點擊次數(shù): 839次

避免任何微生物污染及其內毒素釋放的有效而安全的方法是在生產(chǎn)和運輸過程中保持絕對的無菌。如果采用某種去污染措施,必須保證得到足夠的終產(chǎn)物。Anspach等積累多年的經(jīng)驗總結出,從含蛋白質溶液和不含蛋白質的溶液中去除內毒素是有很大區(qū)別的。對于不含蛋白質的溶液,可采用那些利用內毒素與水、鹽和其他一些小分子物質的分子大小不同來去除內毒素的方法。下面介紹選擇性清除內毒素的方法之超濾法。

9.1選擇性清除內毒素的方法之超濾法.png

凝膠過濾色譜法能從無蛋白質的溶液中去除80%以上的內毒素活性。

超濾類似于血透,是用一種相對分子質量大約為10000的膜,通常所用的水是超純水,整個操作系統(tǒng)使用的儀器均為沒有內毒素污染的無菌設備。另外,在這種條件下內毒素主要以聚集物的形式存在,所以更加安全可靠。但是需要注意的是,雖然這是一個緩慢的過程,然在溫度較高(~100℃)或酸性環(huán)境下(pH3.54.5)時,部分內毒素分子被分解,從而使內毒素分子的實際毒性部分脂質A(相對分子質量2000~4000)大量釋放出來,給內毒素的去除帶來麻煩。

超濾法也可將內毒素從相對分子質量小的產(chǎn)物溶液中去除,如葡萄糖、鹽、許多化學物和不能透過射線的物質以及大多數(shù)抗生素等。相對分子質量為10000的膜也可用于此,產(chǎn)物通過膜彌散的同時內毒素卻被膜扣留。為了使蛋白質產(chǎn)物也能順利彌散出來,膜的孔徑必須大于相對分子質量100000的蛋白質的直徑。在蛋白質存在的情況下,內毒素聚合物分離而成為較小的單體,正如在EDTA或膽酸存在的情況下一樣,內毒素單體和蛋白質在大小上相接近,兩者均能通過超濾膜。

1998年,LiLuo找到了一個提高蛋白質分離度的方法,他們在含85mmol/L血紅蛋白和5mol/ml內毒素的溶液中加入45mmol/LCa2+以改變內毒素溶液的結構,使之成為大的聚合體從而減少內毒素量至6ng/L。用相對分子質量為300000的超濾膜可以使血紅蛋白透過。但是這種方法對于那些溶解度受高Ca2+濃度影響小的蛋白質來說,使用價值有限。


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